Efeito da Suplementação de Cacau Neuropatia Diabética Periférica e Autonômica

O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença de alta incidência no México e está associada ao desenvolvimento de complicações crônico-degenerativas, como a neuropatia diabética. Este último se manifesta como um conjunto de distúrbios que ocorrem como consequência de um estado hiperglicêmico crônico que pode induzir estresse oxidativo e inflamação, resultando em danos ao sistema nervoso autônomo e periférico. No México, foi relatado que essa complicação geralmente ocorre entre 29% e 90% dos pacientes com diabetes. O cacau é um alimento com alto teor de flavonóides, que são compostos fenólicos com efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios. Além disso, seu consumo tem sido associado à diminuição da hiperglicemia e resistência à insulina, melhora da função mitocondrial e, com base no exposto, tem sido sugerido um efeito nas complicações diabéticas; Isso foi demonstrado em modelos in vivo e in vitro, mas não na população humana. Uma vez iniciados os sintomas da neuropatia diabética, são prescritos tratamentos paliativos e, até o momento, não há compostos farmacológicos que tenham demonstrado reverter as consequências da neuropatia diabética periférica e autonômica. Além disso, os ensaios clínicos de compostos com propriedades antioxidantes têm realizado apenas avaliações subjetivas baseadas em questionários sobre a percepção da melhora da neuropatia diabética e alguns marcadores bioquímicos ou testes de condução nervosa, porém, os resultados apresentados não foram conclusivos. É por isso que se propõe um ensaio clínico controlado randomizado, duplo-cego, com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação de cacau em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 e neuropatia diabética periférica e autonômica sobre a) o perfil bioquímico, que inclui a avaliação de o perfil glicêmico e lipídico, quantificação de citocinas pró-inflamatórias e marcadores de estresse oxidativo; b) o perfil clínico por meio da aplicação de questionários padronizados, medidas antropométricas e pressão arterial ec) processamento somatossensorial por meio do teste reflexo H de pulso pareado. Hipótese: A hipótese deste estudo é que a suplementação de cacau terá efeito benéfico no perfil bioquímico e clínico e no processamento somatossensorial da neuropatia diabética periférica e autonômica. Análise estatística: Para a avaliação das variáveis intragrupo, será realizada uma análise estatística com ANOVA para amostras repetidas com post hoc de Tukey, ou, quando apropriado, Friedman com post hoc de Dunn, bem como t de Student para grupos dependentes, ou em seu caso, com Wilcoxon. A comparação intergrupos será feita com T de Student para amostras independentes, ou se aplicável, com U de Mann Whitney, considerando p<0,05 como significância estatística e utilizando o software estatístico GraphPad Prism versão 5. O teste do reflexo H será realizado por estimulação elétrica por meio de eletrodos de superfície descartáveis conectados a um estimulador elétrico bipolar de corrente constante (Digitimer DS8R). O registro dos sinais eletrofisiológicos será realizado por meio de eletrodos de superfície conectados ao sistema de aquisição e amplificação de sinais (LabChart e PowerLab 8/35, ADInstruments). Os sinais obtidos serão amostrados a 10 kilohertz (KHz) com um filtro passa-faixa de 0,5-500 Hz. Os sinais serão armazenados em um computador para análise posterior. A colocação dos eletrodos para estimulação será realizada da seguinte forma: o eletrodo ativo (ânodo) ao nível do tendão de Aquiles, o eletrodo positivo (cátodo) acima do “v” invertido entre os músculos da panturrilha (gastrocnêmio). Posteriormente, o eletrodo de referência será colocado no nível das cabeças do gastrocnêmio. Será estimulado atrás do joelho onde o nervo tibial tem seu trajeto anatômico. O teste começará com uma intensidade de 0 miliamperes (mA) e depois serão dados pulsos a cada 0,5 milivolts (mV) até que o potencial evocado (reflexo H) seja observado de forma consistente e claramente identificável em função da latência (35- 45ms). O estímulo elétrico consiste na aplicação de 1 pulso quadrado (1 ms de duração cada pulso) a cada 10 segundos (10 pulsos no total). A intensidade máxima da corrente aplicada será de acordo com a sensibilidade e tolerância do indivíduo em ambos os membros inferiores durante os testes nos nervos sensitivo e motor. O pulso elétrico aplicado não deve causar uma sensação dolorosa, mas pode causar uma sensação de formigamento. O teste será suspenso se o indivíduo relatar dor ou não desejar continuar com o protocolo de pesquisa. O teste do reflexo "H" será feito em duas partes. A primeira parte do protocolo consiste em determinar a intensidade do estímulo vs. amplitude das respostas motoras a partir do aparecimento da onda "M" e da onda "H", para as quais a corrente elétrica será aumentada em passos de 0,5 µA até o aparecimento das ondas. Para esta parte, apenas um pulso elétrico (duração de 1 ms) será dado a cada 10 segundos. A intensidade de corrente elétrica que será utilizada para a segunda parte do protocolo será aquela cujo valor na curva de amplitude da intensidade de corrente elétrica da onda H atinja 60% da amplitude máxima. Este valor de estimulação garante a reprodutibilidade e variabilidade mínima desta onda, o que também evita a contração muscular que contamina o registro elétrico. A segunda parte constitui o teste de estimulação elétrica pareada em que dois pulsos elétricos (1 ms de duração) serão produzidos em diferentes frequências entre os pulsos: 0,1, 1, 5 e 10 Hz. O intervalo entre os pulsos pareados será de 10 s, até completar 10 séries. Os registros eletrofisiológicos serão analisados com o software Clampfit 10.0. A latência e amplitude dos potenciais evocados H1 e H2 serão determinadas para cada pulso elétrico e em todas as frequências de estimulação, tomando como referência o artefato do estímulo. Posteriormente, a razão da amplitude dos pulsos H2/H1 pareados será determinada para estabelecer a modulação da excitabilidade espinhal. Uma razão ≥0,6 para qualquer frequência de estimulação será considerada um indicador de disfunção no processamento somatossensorial de acordo com Marshall et al.