Efeito da Metformina na Expressão de ABCB1 e AMPK em Adolescentes com Leucemia Linfoblástica Aguda Recentemente Diagnosticada

A leucemia linfoblástica aguda, é o câncer mais frequente em crianças e adolescentes. Até agora, a combinação de agentes quimioterápicos atinge a remissão em mais de 90% dos pacientes. Mas, os adolescentes têm um prognóstico adverso em comparação com as crianças. Os genes de resistência a múltiplas drogas são bem conhecidos como causadores de resistência em diferentes tipos de câncer, sendo o mais importante destes genes a família de genes ABCB, especialmente ABCB1. Essa resistência também é relatada na leucemia linfoblástica aguda. Também alterações na expressão do gene AMPK (adenosina trifosfato) estão relacionadas a efeitos antitumorais dentro da célula. A metformina, uma biguanida, demonstrou diminuir os níveis de ATP intracelular pela ativação da AMPK e o bloqueio da glicoproteína P, produto do gene ABCB1. Muitos relatórios descreveram o efeito da metformina em diferentes tipos de câncer. Em adultos, o uso de metformina demonstrou ser útil na melhora da sobrevida global e livre de eventos, relacionada à baixa expressão de ABCB1/MDR1 (multidrug Resistance 1) e alta expressão de AMPK. Os investigadores propõem se a metformina tem algum efeito sobre ABCB1/MDR1 e AMPK durante a fase de indução da remissão em adolescentes com diagnóstico recente de Leucemia Linfoblástica Aguda. Hipótese: Se a metformina for adicionada à quimioterapia padrão durante a indução da remissão em adolescentes mexicanos com leucemia linfoblástica aguda recém-diagnosticada, os níveis de expressão de mRNA (ácido ribonucleido mensageiro) do gene ABCB1 diminuirão e a expressão do gene AMPK aumentará no final do indução de remissão. Este estudo pretende avaliar o efeito da adição de metformina a um esquema quimioterápico padrão na modificação da expressão dos genes ABCB1 e AMPK durante a indução da remissão de adolescentes recém-diagnosticados com leucemia linfoblástica aguda. Também descrever os níveis de expressão de ABCB1 e AMPK de adolescentes saudáveis e diagnosticados com leucemia linfoblástica aguda. Comparar o nível de expressão desses genes no diagnóstico e no final da indução da remissão; e comparar a sobrevida global e livre de eventos com base na expressão inicial desses genes e o uso de metformina. Os pesquisadores propuseram um ensaio clínico aberto randomizado para comparar a modificação da expressão dos genes ABCB1 e AMPK em adolescentes com leucemia linfoblástica aguda recém-diagnosticada em pacientes recebendo quimioterapia convencional versus quimioterapia convencional mais metformina 1000 mgm2SC por dia durante a fase de indução de remissão do tratamento. Todos os pacientes com nova leucemia linfoblástica aguda entre 10 e 21 anos são convidados a participar, com consentimento informado autorizado. Os critérios de exclusão incluem pacientes com uso prévio de esteróides ou outros quimioterápicos e pacientes com síndrome de Down. Os investigadores pretendem inscrever 10 pacientes para cada grupo. Após a confirmação do diagnóstico morfológico e citometrial de leucemia linfoblástica aguda, os adolescentes são convidados a participar com consentimento informado assinado pelos pacientes e representante legalmente autorizado. As amostras são obtidas de células mononucleares de sangue periférico, o RNA total (ácido ribonucídeo) é obtido por TRIzol ® (Invitrogen(R) Life Technologies). A integridade e pureza do ácido nucleico são determinadas por espectrofotometria. O RNA é congelado a -80ºC até ser necessário. A síntese de DNAc (ácido desoxirribonucélico complementar) é feita a partir de 2 microgramas de RNA, oligonucleotídeos, dNTPs, tampão, MgCl2, KCl (cloreto de potássio) e DTT (ditiotreitol) são adicionados para obter um volume final de 20 microgramas. A mistura é incubada a 37ºC por 2 minutos e 1 microlitro de transcriptase inversa, e incubada por 50 minutos a 37ºC. A qRT-PCR (reação quantitativa em cadeia da plimerase em tempo real) dos genes é feita usando o ensaio de expressão gênica TaqMan®. Os níveis de expressão são calculados usando o método 2-delta-delta-Ct. A quimioterapia de indução de remissão inclui uma pré-fase esteróide de 7 dias de prednisona 60 mgm2SCD. A fase de indução de remissão adequada consiste em prednisona 60 mgm2 diariamente do dia 0 ao 28; Vincristina 1,5mgm2 nos dias 0, 7, 14 e 21; Doxorrubicina 25mgm2 nos dias 0, 7, 21; L-asparaginase 10.000 Um2 nos dias 2, 4, 6, 8, 10 e 12. Etoposídeo 300mgm2 e citarabina 300mgm2 nos dias 22, 25 e 29. A quimioterapia intratecal é administrada nos dias 0, 7, 14 e 21. Após a esquema de indução de remissão, a aspiração de medula óssea é realizada para avaliar a morfologia, se forem relatados menos de 5% de blastos linfoides, os pacientes continuam com a fase de consolidação com metotrexato em alta dose e 6 mercaptopurina, e depois a fase de manutenção até o final do protocolo . As variáveis intermediárias são a contagem de blastos periféricos no dia 0, exame morfológico da medula óssea nos dias 14 e no final da indução e no final da indução DRM (doença residual mínima). A metformina será administrada ao grupo experimental por randomização na dose de 1000mgm2 ao dia, com dose máxima de 850mg três vezes ao dia, do dia -7 ao final do período de indução da remissão. A coleta das amostras de sangue periférico para determinação da expressão dos genes ABCB1 e AMPK será feita no dia -7 e ao final da indução da remissão. O acompanhamento do paciente será feito para calcular a sobrevida global e livre de eventos.